肉的宰后嫩化例如归因于肌原人造氯纶棉设计的严重破坏，肌原人造氯纶棉设计是由内源性球蛋清油脂水解反映酶可分解肌原人造氯纶棉和内部骨架球蛋清引致的。与十多年来一直都在是注意焦聚的钙球蛋清酶不同于，胱天球蛋清酶（caspases）之前形成感喜好的情况题。胱天球蛋清酶在内部凋亡的实施阶段性起着至关极为重要的用处，表中caspase-3在死去球蛋清油脂水解反映中的用处是多部分面和更复杂的，所以说适合进1步分析。S-亚硝基化能够控制钙放出、能量转换新陈代谢、球蛋清质可分解和内部凋亡来控制吃起来，例如嫩度和持水本事。下一步分析察觉到S-亚硝基化需要调低依赖症线粒体的caspase-3级联反映，这也许是腿部肌肉内部凋亡和鸡肉产品质量變化的的原因。caspase-3的分析重大是其与内部凋亡的社会关系，因此，比较少的有分析浅议S-亚硝基化控制caspase-3的制度化。

2024年9月由杭州现代农业综合大学张万刚讲师队伍在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化装饰组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

英文版版头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年印象指数公式：5.7

提出时段：2024年9月

投资者方：南京农业大学

研究探讨板材：蛋白

拜谱供给技能：亚硝基化修饰组学

枝术自驾线路：

一、理论研究后果

01.Caspase-3活性酶类

现阶段尚不很清楚NO对caspase-3的抑止影响能不归因于NO介导的S-亚硝基化，各不相同盐浓度梯度方向的GSNO最为外源性NO现货供应，以介导caspase-3的休外S-亚硝基化。然而体现了，与并没有GSNO的组比起，100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化更为明显下降（图1），与已经新闻报道一样的。GSNO治理 下降caspase-3化学活化的潜在性的的原因仍迫切需要阐述。

图1 不一渗透压的GSNO工作对caspase-3特异性的影响到

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化情况

学习Caspase-3的亚硝基化层面，以具体分析GSNO对Caspase-3的想法性。经GSNO净化处理后，检查测量到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化难度新增（图2）。这部分报告认为，外源性GSNO锻炼可成功的诱导性caspase-3的休外S-亚硝基化。可笑咋舌的是，在不GSNO现实存在的照表组中检查测量到个绚烂的S-亚硝基化带，这认为caspase-3已经的发生内源性的S-亚硝基化。另外，本学习中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的吸附性降，这与时候的学习同步。既使，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化体现位点尚不了解清楚，还必须要进三步的探秘。

图2 GSNO正确处理对caspase-3S-亚硝基化水平方向的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。暗蓝色记号的字段代表S-亚硝基化肽，橙红色记号的C代表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3生物降解结核蛋白

结蛋清做的比较重要性的体细胞核骨架蛋清，在达到肌体细胞核机构的机构系统性和回缩性的方面起突出要性做用，深入分析S-亚硝基化caspase-3对结蛋清分解的神经敏单纯包括比较重要性功用。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的初始值肌钎维蛋清）组相较于，0 μM GSNO组（肌原钎维和caspase-3的孵育，无GSNO）的系统结蛋清份量特殊大大减少，警告caspase-3对结蛋清包括存在的蛋清油脂水解力量。在GSNO孵育后，系统结蛋清的份量特别不断增加（P < 0.05）。不仅如此，当GSNO渗透压增加时，系统结蛋清的份量定期上涨（P < 0.05）（图5）。某种挖掘发现，SNO遮盖的caspase-3以技术依懒的的方式遏制结蛋清的分解。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结蛋白质

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙球蛋白-T

肌钙血清质酶-T (TnT)是原肌球血清质酶调结责任人力量拉伸的丝条的一定肌原仟维血清质酶。TnT的溶解症状是查重到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化环境下，caspase-3对TnT的溶解状况如下图如图6如图，与Std组（会含caspase-3和GSNO的肌原仟维）相比之下，caspase-3组中30 kDa TnT场面同质性增强，表示caspase-3参与的了TnT的溶解，另外，caspase-3与GSNO的孵育以至于30 kDa TnT减低。在100和200 μM GSNO组中间未查重到明显的的差别(P > 0.05)，而当GSNO的氨水浓度可达到400 μM 时，该场面同质性缩减(P < 0.05)。他们挖掘表示了SNO呈现的caspase-3对TnT溶解的阻止的功效。结血清质酶和TnT是caspase-3的过敏底物，而GSNO补救大幅度减少caspase-3的渗透性也许 以至于肌原仟维血清质酶溶解程度上大幅度减少。上面提出的，NO帮助的S-亚硝基化就可以顺利通过呈现半胱氨酸残基来调结caspase-3的渗透性，于是进一大步引响其对结血清质酶和TnT的血清质酶电离工作能力，得以引响牛肉片品质保证。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本研究浅议亟需浅议S-亚硝基化对caspase-3装饰的反应十分自后对鸡肉肌原食物氯纶体内挥发的反应。淀粉酶酶质S-亚硝基化能装饰caspase-3的半胱氨酸残基，以此形成caspase-3活力性减低，进一个步骤抑制作用了其对鸡肉肌原食物氯纶淀粉酶酶质的淀粉酶酶质电离技能。

三、拜谱总结ppt

学习使用了酶活检验，亚硝基化呈现组学了解，WB等检查制度，看到血清S-亚硝基化应该呈现caspase-3的半胱氨酸残基，这以至于了caspase-3吸附性的有效降低，并举的一步缓和了其对羊肉肌原纤维棉血清的血清溶解水平。本学习为解说血清质亚硝基化对肉肥的宏观调控制度给出半个个新的画面。

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参考使用论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663